Pokročilý fluorescenční systém Leica TIRF MC
Leica Microsystems představuje mikroskop s TIRF (Total Internal Reflection Fluorescence) MultiColor iluminací. Tento systém je určený pro pozorování procesů probíhajících na membránách živých buněk. Systém zahrnuje všechny lasery nutné pro excitaci všech důležitých fluorochromů, umožňuje velmi rychlé přepínání mezi jednotlivými vlnovými délkami a zabezpečuje při každé změně vlnové délky konstantní hloubku penetrace.
Stáhnout flash animaci Leica TIRF modulu: Leica_AM_TIRF_MC-animation_EN.exe
Leica TIRF MC s černým klimaboxem.
Základní charakteristiky Leica TIRF MC:
- integrace vlnových délek 405, 488, 561, 635 nm do jednoho
systému a jejich rychlé ovládání pomocí AOTF
- korekce hloubky penetrace při změně vlnové délky
- kombinace TIRF a rychlého FRET
- vysoká propustnost světla pro maximální zisk signálu
- systém plně integrovaný do LAS AF software
- přepínání mezi TIRF, procházejícím světlem a fluorescenční
mikroskopií jedním kliknutím
- Leica EL 6000 – externí zdroj fluorescence s dlouhou
životností (až 2000 hodin) pro wide-field fluorescenci
- systém je kompatibilní s Leica SD 6000 (nutná jenom jedna EMCCD
kamera pro celý systém tj. pro wide-field procházející světlo, pro
wide-field fluorescenční mikroskopii, pro TIRF mikroskopii a pro konfokální
SD 6000 jednotku)
Schéma TIRF modulu.
Součástí Leica TIRF MC je dynamický TIRF modul, který kontroluje polohu laserového paprsku a tím určuje přesnou hloubku penetrace evanescentního pole. V softwaru si pak uživatel jednouše určí tuto hloubku a systém již sám nastaví laser do správné polohy. Přepínání vlnové délky (405, 488, 561 a 635 nm) je v softwaru velmi jednoduché, přičemž systém automaticky koriguje polohu laseru při změně vlnové délky tak, aby byla hloubka penetrace konstantní.
Princip TIRF
V TIRF modulu jsou zabudované automatické detektory pro odražené světlo a je tam také zabudovaný refraktometr. Zohledněním všech parametrů (použitá vlnová délka laseru, index lomu a úhel dopadu laseru) systém matematickou kalkulací vypočítá hloubku penetrace. Uživatel si pak v softwaru snadno zvolí hloubku penetrace od 70 nm po 300 nm. Kromě hloubky penetrace si uživatel může zvolit i orientaci osvětlení vzorku.
TIRF objektiv 100× – NA 1,46.
Pozorování dějů na membránách živých buněk samozřejmě vyžaduje zabezpečení ideálních podmínek pro buněčnou aktivitu. Leica TIRF MC je vybavitelný klimakomorou vyvinutou specielně pro tento systém. Kontroluje se teplota i koncentrace CO2. Pro snímání rychlých živých dějů jsou ideální vysoce citlivé a vysokorychlostní EMCCD kamery, které jsou samozřejmě podporované LAS AF softwarem.