STED - konfokální mikroskop s extrémně vysokým rozlišením
STED (Stimulated Emission Depletion) Superresolution FluorescenceMicroscope
Stimulated Emission Depletion Microscopy (STED mikroskop) je metoda, která překračuje difrakční omezení klasické fluorescenční konfokální laserové mikroskopie a klasické fluorescenční mikroskopie pomocí zmenšení aktivní plochy pulsní excitace bodu pomocí synchronizované laserového svazku kruhového pruřezu.
Výsledkem je to, že STED mikroskopie dosahuje molekulárního rozlišení, které nabízí obrovské možnosti ve všech oblastech biomedicínského výzkumu.
Konfokální a multifotonový systém:
- plně automatizovaný inverzní výzkumný mikroskop Leica DMI6000 CS
- vybavení pro fluorescenci včetně externího světelného zdroje EL6000 a propojení optickým vláknem
- spektrální konfokální laserový skenovací systém Leica SP5 s tandemovým skenerem (konvenční a rezonanční)
- RGB viditelné lasery (HeNe 633nm, HeNe 543nm a vícečarový Ar laser 458, 476, 488, 496 a 514nm) kontrolované AOTF a napojené do konfokální hlavy optickým vláknem
- AOBS Acousto-optical beam splitter
- až 5 spektrálních detekčních kanálů: 4 konfokální/dva dvoufotonové a 1 STED kanál
- 2 APD (Avalanche Photo Diode) kanály (1 vhodný pro STED)
- laserový skenovací transmisní detektor
- přesný skenovací stolek včetně SuperZ Galva
- dodatečné vybavení: nekonfokální transmisní a reflexní detektory
STED rozšíření
- excitace jednou vlnovou délkou pomocí diodového laseru 635nm
- depletion Spectra-Physics MaiTai Broadband: vhodný pro STED navázáním optickým vláknem (rozsah 735–800nm) nebo plný spektrální rozsah přes přímé navázání pro klasickou dvoufotonovou mikroskopii
- xy rozlišení (FWHM) záleží na barvě, vzorku, vlnové délce, typicky je kolem 90nm, obvyklé oddělení jednotlivých objektů bez dekonvoluce přibližně 70nm
- z rozlišení (FWHM) kolem 550nm
- automatické ladění svazku excitačního a deplečního for dlouhodobou stabilitu a velmi dobrou ergonomii
- navázání STED je přes UV port Leica TCS SP5
- UV barvení mohou být excitována pomocí dvoufotonového laseru, když se nepracuje ve STED módu
- použitelné STED barvy: Atto 647N (750nm depletion), Atto 655 (480nm depletion), další jsou zkoumány
- STED zobrazování pomocí speciálně vybíraných STED objektivů HCX PL APO 100×1,4 Oil CS STED, skenovací pole 75×75 mm2 nebo menší, velikost pixelu pod 30nm pro plné rozlišení
- typická rychlost snímání pro STED je 1 minuta pro formát 512×512 pixelů, pro menší formáty je rychlost vyšší
Detekce STED je výběrová (jeden STED kanál):
APD (Avalanche Photo Diode) pro nejvyšší citlivost
PMT (Photomultiplier) pro největší dynamický rozsah
Podrobné informace v angličtině:
Preview
of Leica TCS STED (0,66 MB)
preview
of STED Technical Specs(0,05 MB)